有热心站友在站内提问：

我们实验室最近在做小鼠脾脏淋巴细胞的实验，检测项目有T淋巴细胞亚群，记忆性T细胞和细胞因子等，前期我们使用两种方法来分离小鼠脾脏淋巴细胞：一种是使用淋巴细胞分离液，一种是直接用溶血素裂红，用流式检测得出的结果不同。首先CD3+的百分比不同，溶血素是30%左右，淋巴细胞分离液是24%左右；

其次CD3+CD8+和CD3+CD4+两群细胞的比例也不同。

下面分别是两种方法的流式结果：1、溶血素方法分离的小鼠脾脏淋巴细胞的CD3+细胞比例和CD3+细胞里CD4+和CD8+细胞的比例

2、淋巴细胞分离液分离的小鼠脾脏淋巴细胞的CD3+细胞比例和CD3+细胞里CD4+和CD8+细胞的比例

是我们的淋巴细胞分离液有问题吗？做了很多次都是这样，每次都是用同一只小鼠的脾细胞来做,感觉溶血素方法做出来的结果比较可靠,这个问题该怎么解决？求解，谢谢！

其实这个问题应该在不少站友都碰到，但很多人没有认真比较过，方法学的不正确，可能就是有些实验结果不正确或不稳定的原因。我来讲一下我个人观点：

“溶血素法的优点就是保留所有细胞成份，缺点是容易受到红细胞和碎片干扰，但是通过CD45设门以及死活鉴别染料，可以很完美的克服这些缺点；Ficoll分离法的优点是细胞比较干净，红细胞和碎片基本上被去光了，粒细胞也很少了，只剩下单个核细胞，于是就只能用在单核细胞和淋巴细胞的检测上。但关键是它保留单个核细胞的能力还是有限的，容易丢失一些稀有细胞和部分淋巴、单核细胞，并且某种程度上可能对有些细胞活性有影响。一般情况下，能用溶血法的尽量用溶血，并且尽可能自己配制氯化铵裂解液，不但效果好，而且成本便宜。。